Yuji Nakamura; Issei S Shimada; Reza Maroofian; Micol Falabella; Maha S Zaki; Masanori Fujimoto; Emi Sato; Hiroshi Takase; Shiho Aoki; Akihiko Miyauchi; Eriko Koshimizu; Satoko Miyatake; Yuko Arioka; Mizuki Honda; Takayoshi Higashi; Fuyuki Miya; Yukimune Okubo; Isamu Ogawa; Annarita Scardamaglia; Mohammad Miryounesi; Sahar Alijanpour; Farzad Ahmadabadi; Peter Herkenrath; Hormos Salimi Dafsari; Clara Velmans; Mohammed Al Balwi; Antonio Vitobello; Anne-Sophie Denommé-Pichon; Médéric Jeanne; Antoine Civit; Mohamed S Abdel-Hamid; Hamed Naderi; Hossein Darvish; Somayeh Bakhtiari; Michael C Kruer; Christopher J Carroll; Ehsan Ghayoor Karimiani; Rozhgar A Khailany; Talib Adil Abdulqadir; Mehmet Ozaslan; Peter Bauer; Giovanni Zifarelli; Tahere Seifi; Mina Zamani; Chadi Al Alam; Javeria Raza Alvi; Tipu Sultan; Stephanie Efthymiou; Simon A S Pope; Kazuhiro Haginoya; Tamihide Matsunaga; Hitoshi Osaka; Naomichi Matsumoto; Norio Ozaki; Yasuyuki Ohkawa; Shinya Oki; Tatsuhiko Tsunoda; Robert D S Pitceathly; Yoshitaka Taketomi; Henry Houlden; Makoto Murakami; Yoichi Kato; Shinji Saitoh
Fatma M Minisy; Hossam H Shawki; Tsubasa Fujita; Ahmed M Moustafa; Rumeysa Sener; Youske Nishio; Issei S Shimada; Shinji Saitoh; Mayumi Sugiura-Ogasawara; Hisashi Oishi
Vivek Reddy Palicharla; Sun-Hee Hwang; Bandarigoda N. Somatilaka; Emilie Legué; Issei S. Shimada; Nicole E. Familiari; Vanna M. Tran; Jeffrey B. Woodruff; Karel F. Liem; Saikat Mukhopadhyay
Molecular Biology of the Cell 34 3 2023年03月 [査読有り]
[1]ヒト由来の腎オルガノイドを用いて健常者と尿路結石患者の腎形態を比較する
① 健常者および尿路結石患者由来iPS細胞の作製
研究に同意を得た健常者、尿路結石患者から血液を採取し、全血から末梢血単核細胞を分離後、エピソーマルベクターを用いて山中4因子(Oct3/4、Sox2、Klf4、c-Myc)を導入し、iPS細胞を作製した。本研究では安定したiPS細胞確立のため、外部受託を行った。尿路結石患者由来のiPS細胞は計5クローン作製され、その後の拡大培養により腎オルガノイドの作製に必要な細胞数が充分量確保された。
② 健常者および尿路結石患者由来の腎オルガノイドの作製
作製したiPS細胞を、高里(Nature, 2015)らの手法を用いて、CHIR99021、FGF9の付加により腎前駆細胞へと分化させ、遠心分離による再集合の形成と三次元培養を経て腎オルガノイドを誘導した。また今後の実験系において適した腎オルガノイドを作製するため、Freedman(Nat Commun, 2015)らの手法を用いて、CHIR99021、B27の付加により遠心分離を行なわなず、Spheroidを形成させることによる腎オルガノイドの誘導も行った。作製された腎オルガノイドの評価は、いずれの手法によるものもホールマウント免疫染色にて行った。健常者由来と尿路結石患者由来の腎オルガノイドは、WTI、LTL、E-cadherinの免疫染色によって、それぞれ糸球体、近位尿細管、遠位尿細管の構造が発現していることを確認した。この際、健常者と尿路結石患者由来を比較したが、免疫染色上で確認される組織構造の相違は認めなかった。